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PG电子 TurboKnockout®技术:高效基因编辑及100%嵌合Founder小鼠的实现

来源:胥姣朗 日期:2025-08-02

下一代全基因组人源化小鼠构建技术:基于传统的ES打靶技术,PG电子推出了升级版的TurboKnockout®基因编辑技术。该技术通过优化的纯合ES克隆打靶体系,能够有效筛选出基因敲除、敲入及点突变的纯合ES细胞。借助囊胚前注射和四倍体补偿技术的结合,该技术确保生成的创始小鼠达到100%的嵌合状态,使得所有组织细胞均完全集成自外源ES细胞,从而有效解决了传统方法中嵌合体比例不稳定的问题。此外,基因编辑的周期缩短至3个月,能够大批量获得基因一致的纯合子小鼠。

PG电子 TurboKnockout®技术:高效基因编辑及100%嵌合Founder小鼠的实现

PG电子的TurboKnockout®技术稳定性经过了一系列严格的实验验证,具体流程包括载体构建、ES打靶、PCR/FACS验证、阳性胚胎制作,以及“100%”嵌合F0胚胎及小鼠的生产与验证。首先,我们构建了Rosa26安全位点过表达载体CAGLuciferaseEGFP质粒,并在C57BL/6NWTES细胞上获得PCR阳性克隆,随后通过流式细胞仪验证EGFP的正确表达。

接着,将获得的阳性ES克隆通过显微注射生成阳性创始小鼠,进一步进行常规传代以获得纯合F2代雄鼠。将F2雄鼠与C57BL/6NWT雌鼠交配,以产生可供TurboKnockout®技术显微注射的阳性受体胚胎。通过在该背景胚胎中显微注射C57BL/6NWT的ES细胞和未注射ES细胞的空扎受体胚胎,分别产生125d胚胎及4周龄的创始小鼠,从而验证创始小鼠Luciferase和EGFP的表达情况。结果显示,125d的空扎胚胎相比注射C57BL/6NWTES细胞的胚胎表现出明显的EGFP表达。

对于空扎胚胎和注射了WTES细胞的胚胎,在ICR代孕鼠中进行移植,结果发现注射了C57BL/6NWTES细胞的胚胎未检测到Luciferase荧光泄露表达,同时空扎胚胎发育而来的小鼠则表现出较强的Luciferase荧光,结果差异显著。此外,为进一步验证注射了C57BL/6NWTES细胞的胚胎是否存在CAGLuciferaseEGFP细胞嵌合,对注射了WTES细胞的4周龄小鼠及125d胚胎的组织进行PCR验证,结果显示各组织和胚胎均未检测到MT条带。

总结而言,通过PG电子的TurboKnockout®技术生产的创始小鼠具有100%的嵌合状态,所有创始小鼠的组织细胞均由外源ES细胞分化而成。该技术具有以下优势:首先,编辑类型多样化,能够进行基因敲除、敲入、点突变以及人源化等不同项目的基因修饰;其次,质量控制(QC)体系多样化,除了常规PCR鉴定外,还可通过染色体核型、Southern Blot、qPCR、FACS等多种方法进行质量检验;第三,F0基因型稳定,结合PG电子的专利技术,确保所有F0代小鼠基因型一致,基因修饰准确且效果稳定;最后,品系选择灵活,可提供多个品系选项。

在此基础上,PG电子推出的HUGO-GT®全基因组人源化模型充分利用TurboKnockout®技术,实现鼠源基因的原位替换,提供更丰富的干预靶点,成为临床前药物研究的理想模型。此外,我们还提供针对眼科、神经及肿瘤免疫等领域的CRO服务,助力遗传性疾病研究和基因治疗药物的开发。

同时,基于全人抗体药物研发需求,PG电子推出了HUGO-Ab®全人源抗体小鼠,携带全套人类免疫球蛋白基因,能够在体内产生具有高亲和力和低免疫原性的全人源抗体。我们的系列产品包括HUGO-Mab™全人单克隆抗体小鼠,HUGO-Light™全人共轻链抗体小鼠以及HUGO-Nano™全人纳米抗体小鼠,展示出丰富的抗体序列多样性,受到多家跨国药企及学术机构的认可。

此外,PG电子还提供各种基因编辑定制服务,包括完全性基因敲除小鼠、条件性基因敲除小鼠,以及灵活构建完全性或条件性敲除小鼠,以适应不同行业的研究需求,快速提供高效工具支持药物筛选、信号通路分析及遗传机制解析。

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