PG电子人前列腺癌细胞VCAP培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人前列腺癌细胞VCAP

生长特性：贴壁

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：DMEM（含NaHCO3 15g/L）+ 10% FBS + 1% P/S

传代方法：第一次建议1:2传代；传代情况：每2天换液。

备注：使用无菌离心管收集培养基样本以备比较。如果对比培养效果不理想，建议直接购买PG电子的完全培养基。

二、细胞处理

收到细胞后，待其培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，使用75%酒精对整个细胞瓶表面进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续操作。使用显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片则默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱培养；如果细胞密度超过80%，可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，随即观察细胞的消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，再加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中进行培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，然后轻轻吹打细胞使其脱落，转移悬液至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的PG电子无血清冻存液（货号：C7001），混匀并转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，若需要后期转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中进行培养。
4. 第二天，换用新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能会因粘附不牢而发生脱落，这是正常现象。如果脱落较多，请将培养瓶中的所有培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养（后期可用于对比培养）。沉淀后加入胰蛋白酶1-2ml，轻轻吹打使其重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再离心、弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。最后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，然后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中进行培养。

五、售后条款

1) 关于细胞问题的重发条件

1. 若细胞在运输过程中出现丢失、瓶身破损、培养液严重泄漏等问题，均可重发。
2. 若细胞污染问题，请在收到产品48小时内向我们反馈真实实验结果，经核实后可重发。
3. 针对常温发货的细胞，若静置24小时后或者干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内，大多数细胞未存活（需提供清晰的细胞状态照片），均可重发。
4. 对于干冰运输的细胞，復苏后24小时或常温运输的细胞静置4小时后发生污染，亦可申请重发。
5. 若细胞活性存疑，请在7天内提供真实实验结果，通过台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后将予以重发。
6. 收到细胞当天及第2、3天请拍照，未告知视为产品合格。若4-7天内出现问题，需提供前3天的照片以及操作的详细步骤，若经技术人员判定为我方责任，将予以重发；若为双方责任，则通过协商处理或者收取50%合同价进行重发。

2) 关于不予重发的情况

1. 客户自身造成的细胞污染，无法重发。
2. 客户因不正确操作导致细胞状态不佳，无法重发。
3. 使用非本库推荐的细胞培养体系导致状态不佳，无法重发。
4. 若细胞状态不佳且未提供培养前3天的照片，无法重发。
5. 细胞培养过程中有其他处理，无法重发。
6. 若细胞在收到2天内未告知问题，将无法重发。
7. 具体情况由我方酌情处理。

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