PG电子人β干扰素(IFN-β) Elisa试剂盒使用说明

本试剂盒仅供科学研究使用，禁止用于医学诊断。

检测原理

本试剂盒采用双抗体一步夹心法进行酶联免疫吸附测定（ELISA）。首先在预先包被有adropin（AD）抗体的微孔板中，按照顺序加入样本、标准品和HRP标记的检测抗体。经过温育和彻底洗涤后，加入底物TMB进行显色反应。在过氧化物酶的催化下，TMB转化为蓝色，然后在酸的作用下变为黄色。颜色的深浅与样品中adropin（AD）的浓度成正比。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算出样本浓度。

样本收集、处理及保存方法

1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，避免细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟，迅速分离血清和红细胞。

2. 血浆：使用EDTA、柠檬酸盐或肝素进行抗凝，3000转离心30分钟取上清。

3. 细胞上清液：3000转离心10分钟以去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织与生理盐水混合捣碎，3000转离心10分钟取上清。

5. 保存：如未及时检测样本，需按一次用量分装并冷冻保存于-20℃，避免反复冻融，并确保在室温下充分解冻均匀。

自备物品

1. 酶标仪（450nm）
2. 精密加样器及枪头：05-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱

操作注意事项

1. 试剂盒应存放于2-8℃，使用前室温平衡20分钟。浓缩洗涤液从冰箱取出时会出现结晶，这属于正常现象，需水浴加热使其完全溶解后再使用。

2. 实验中未使用的板条应立即放回自封袋中，密封保存于低温干燥处。

3. S0号标准品（浓度为0）可作为阴性对照或空白；按照说明书操作时，样本已稀释5倍，最终结果需乘以5获得样本实际浓度。

4. 严格按照说明书中规定的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5. 所有液体组分使用前需充分摇匀。

试剂盒组成

PG电子标准品（S0-S5）浓度依次为：0、25、50、100、200、400pg/mL

试剂的准备

20×洗涤缓冲液的稀释：用蒸馏水按1:20的比例稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

洗板方法

1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1分钟后甩去孔内液体，在吸水纸上轻拍干燥，重复洗板5次。

2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1分钟，洗板5次。

操作步骤

1. 从室温平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需的板条，剩余的板条用自封袋密封放回4℃保存。

2. 设置标准品孔和样本孔，各标准品孔加入不同浓度的标准品50μL；

3. 在样本孔中先加入待测样本10μL，再加入样本稀释液40μL；空白孔不需加样。

4. 除空白孔外，在标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，在37℃水浴或恒温箱中孵育60分钟。

5. 弃去液体，吸水纸上轻拍干燥，每孔加满洗涤液，静置1分钟后甩去洗涤液，吸水纸上拍干，重复洗板5次（也可用洗板机）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，在37℃下避光孵育15分钟。

7. 每孔加入终止液50μL，在15分钟内于450nm波长下测定各孔的OD值。

结果判断

在Excel中绘制标准曲线，以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制线性回归曲线，并按曲线方程计算各样本的浓度值。

试剂盒性能

1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值应大于等于0.9900。

2. 灵敏度：最低检测浓度小于10pg/mL。

3. 特异性：该试剂盒不会与其他可溶性结构类似物发生交叉反应。

4. 重复性：无论是板内或板间的变异系数均应小于15%。

5. 贮存条件：应在2-8℃环境中，避光防潮保存。

6. 有效期：该试剂盒自生产之日起有效期为6个月。

免责声明

1. 本试剂盒仅供研究使用，禁止用于临床实验或人体实验，实验造成的后果由实验者承担，PG电子对此不负任何责任。

2. 请严格按照说明书进行操作，若实验者违反说明书操作规程，后果自负。