PG电子的人小细胞肺癌细胞DMS114培养说明书详细介绍了细胞的培养条件与注意事项，帮助研究人员更有效地进行细胞培养操作。

一、细胞培养条件

细胞名称：人小细胞肺癌细胞DMS114

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：第一次建议以1:2的比例进行传代

备注：用无菌离心管收集瓶中培养基，留作对比实验。如果对比实验效果不理想，建议直接购买PG电子的完全培养基。

二、细胞处理与培养

收到细胞后，将其培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口是最佳的运输细胞方法。

收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶，进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续操作。显微镜下观察细胞生长情况，并拍照保存（建议40x、100x及200x各一张）。前三天的照片将作为售后依据，如未提供照片，默认为收到状态良好。

（传代后建议用原瓶的完全培养基进行一瓶培养，另一瓶用自配的完全培养基，以便对比培养，换液后瓶盖应松开。）

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5毫升完全培养基，放入37℃、5% CO2培养箱中进行培养；如果细胞密度超过80%，则进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2毫升至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞一旦大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻轻敲几下培养瓶后加入5毫升以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻拍细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15毫升离心管中，以1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，并补加1-2毫升完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8毫升/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1毫升至培养瓶中，观察细胞缩回变圆后，加入5毫升完全培养液终止消化，并 gently 吹打使细胞脱落，然后悬液转移至15毫升离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1毫升PG电子无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转装入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中。如果后期需要转入液氮罐，则须先在-80℃冰箱中存放24小时以上，再进行转移。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直到无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管内的细胞移至含5毫升完全培养基的15毫升离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5毫升完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶中，在37℃，5% CO2培养箱中培养。
4. 第二天，更换新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，有些细胞可能会出现脱落现象，这是正常现象所在。如脱落较多，可将培养瓶内液体收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养，再加入胰酶1-2毫升轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，加入5毫升完全培养基终止反应。再离心并完成重悬，按照1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新鲜完全培养基至5-8毫升/瓶，并最后放置在37℃，5% CO2培养箱中继续培养。

五、售后条款

1）可重发的情况

1. 细胞运输过程中出现丢失、瓶身破损、培养液漏液等情况，予以重发。
2. 细胞污染问题需在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后可重发。
3. 常温发货细胞静置24小时后，干冰运输细胞复苏后24小时内若存活率低且附上真实细胞照片，予以重发。
4. 如干冰发货的细胞在复苏24小时内或常温发货的细胞在未开封的情况下出现污染，予以重发。
5. 细胞活性问题需在收到产品7天内提供真实实验结果（使用台盼蓝染色法检测），核实后进行重发。
6. 细胞收到当天及第2、3天请拍照留存，逾期未告知视为产品合格；若4-7天内出现问题，须提供前3天照片和详细操作步骤，经技术人员判定后可重发。

2）不予重发的情况

1. 客户造成的细胞污染，不予重发。
2. 因客户操作失误导致细胞状态不良，不予重发。
3. 非PG电子推荐的细胞培养体系造成的细胞问题，不予重发。
4. 若细胞状态不佳而未提供培养前3天的照片，不予重发。
5. 在培养时进行了其他处理的细胞不予重发。
6. 细胞在收到2天内未反馈的问题，不予重发。
7. 具体情况将视具体情况而定。

以上是PG电子的人小细胞肺癌细胞DMS114的相关培养和操作说明，请遵循相关步骤以确保实验的成功和细胞的健康生长。