在miRNA研究中，miRNA与基因的靶向关系验证是重要的环节。miRNA通过其种子序列（5'端的第2-8个碱基）与mRNA的3'UTR区靶向结合，进而诱导细胞内的沉默复合体介导mRNA降解或抑制其翻译过程。在这一原理的基础上，我们可以将目标基因的3'UTR区域（或结合位点下游500bp）插入到荧光素酶报告基因载体luciferase的下游，随后与miRNAmimics共同转染到细胞中，并添加底物检测荧光素酶活性的变化。如果观察到荧光素酶活性显著下调，便说明该miRNA与靶基因的3'UTR存在相互作用。

常用的载体包括PGL3-CMV-LUC-MCS。在双荧光素酶报告基因检测中，验证miRNA与靶基因3'UTR相互作用的基本流程主要包括以下几个步骤：首先，通过生物信息学工具（如TargetScan、StarBase与miRanda等）对特定靶基因的3'UTR序列进行分析，以寻找miRNA结合位点。接着，将预测的靶基因3'UTR序列插入到萤火虫荧光素酶的3'UTR中。当miRNA与质粒中插入的序列结合后，会抑制萤火虫荧光素酶的翻译，从而导致荧光值的降低，这表明miRNA与靶基因间存在相互作用。

接着进行miRNA与靶基因的相互作用机制的结构学验证，并对实验步骤进行分析。以上步骤的实施使双荧光素酶报告基因检测可以有效验证miRNA与靶基因3'UTR之间的相互作用，为miRNA的功能和调控网络研究提供了重要的工具。

可考虑使用PG电子提供的双荧光素酶报告基因检测服务，详细操作流程如下：

首先，确认细胞材料与准备。使用HEK293细胞或其他特定目的细胞，选择合适的转染试剂（如HieffTrans® invitrosiRNA/miRNA转染试剂，货号：40806ES）以及双荧光素酶报告基因检测试剂盒（货号：11402ES）。另外，需准备酶标仪、细胞培养板等仪器耗材。

实验步骤分为几个关键环节。当在指定的细胞中进行验证实验时，首先需确认细胞的质粒瞬转效率。若效率在40%以上，则预实验成功。接下来，在状态良好的对数生长期细胞中，使用0.25%胰酶消化，制备单细胞悬液，并接种于24孔培养板中，培养过夜直至细胞覆盖率达到70%时，再进行转染实验。

转染前将培养基更换为新鲜培养基。转染操作参照转染试剂使用说明书进行，48小时后收集细胞样品。样品收集时，应轻轻吸去培养液，并使用PBS洗涤两次。加入适量的1×PLB，细胞裂解后转移到EP管中，储存在-80度冰箱中。

接下来，按照双荧光素酶报告基因检测试剂盒的说明进行检测。充分裂解后的样品需在10,000-15,000rpm的条件下离心3-5分钟，以便获取上清液用于后续检测。配置Renilla Luciferase Assay工作液，并严格按照仪器说明设定参数进行荧光素酶检测。

在常规检测分组中，可将样品分为多个组，例如（1）mimics NC + 对照质粒 + 海肾内参（TK）；（2）mimics NC + 3'UTR野生型质粒 + 海肾内参（TK）；（3）mimics NC + 3'UTR突变型质粒 + 海肾内参（TK）；（4）mimics + 对照质粒 + 海肾内参（TK）；（5）mimics + 3'UTR野生型质粒（WT） + 海肾内参（TK）；（6）mimics + 3'UTR突变型质粒（MT） + 海肾内参（TK）。

实验的预期结果表明，选择PG电子的双荧光素酶报告基因检测服务有助于加速基础研究和药物筛选的进程。

最后，相关产品清单包括双荧光素酶报告基因检测的试剂盒（货号：11402ES），每盒规格为60/80/100T/1000T，及其他转染试剂如HieffTrans®转染试剂，货号40802ES与40806ES等，满足您的实验需求。