新生儿坏死性小肠结肠炎（NEC）是一种常见于早产儿的致命肠道疾病，但其发病机制目前仍未完全揭示。近期发表于《Immunity》的一项研究探讨了胆汁酸受体FXR在调控肠道上皮细胞铁死亡及ILC3功能中的关键角色，进一步加深了我们对NEC病理机制的理解，并且提出了新的治疗靶点。以下将为您解析这项研究的核心技术、实验设计及所得结论。

一、核心实验技术全景

该研究采用多组学技术与先进的分子生物学方法，逐层验证了其科学假设：

1. 通过单细胞RNA测序（scRNA-seq）分析NEC小鼠的肠道上皮细胞（IECs）转录组异质性，发现FXR在肠细胞中的特异高表达。
2. 运用流式细胞术检测IECs中FXR蛋白的表达，并对ILC3（CD45⁺Lin⁻CD902⁺CD127⁺KLRG1⁻）进行功能分析。
3. 设计多重荧光免疫组化（mIHC）Panel，进行FGF19及FXR与脂质过氧化的共定位分析，揭示在NEC患者肠道中FXR与氧化损伤的时空关联。
4. 通过脂质组学（LC-MS/MS）定量分析磷脂过氧化物（PE-PUFAs），证实FXR通过上调ACSL4促进铁死亡。
5. 构建肠道特异性FXR敲除小鼠（Fxr^AlEC），结合NEC诱导模型进行研究。
6. 利用染色质免疫沉淀（ChIP）结合荧光素酶报告，确认FXR直接结合ACSL4启动子并调控其转录活性。

二、样本分组逻辑

研究通过临床样本与动物模型的双向验证进行：

1. 临床样本方面，NEC组包括6例确诊为NEC的患儿（提供血浆及肠道组织），对照组则是6例年龄匹配的非NEC患儿（从先天性肠道畸形手术中取正常肠段）。
2. 小鼠实验设定基因型分组为Fxr^AlEC（肠道FXR敲除）与Fxr^fl/fl（野生型对照），同时进行了干预分组，包括FXR调控（激动剂Fexaramine、拮抗剂Gly-β-MCA）和铁死亡干预（抑制剂Liproxstatin-1、ACSL4抑制剂PRGL493）。

三、颠覆性结论

1. 研究表明FXR是NEC的关键驱动因子，NEC患儿的肠道FXR表达显著升高，并与血浆FGF19（FXR下游靶标）呈正相关，暗示FXR激活可能加剧疾病。
2. NEC相关的微生物-上皮细胞互作失衡导致肠道菌群失调，进而减少短链脂肪酸（SCFAs，如丁酸），解除这些短链脂肪酸对FXR的抑制，导致肠上皮铁死亡。
3. 通过转录激活ACSL4，FXR促进脂质过氧化和铁死亡，死亡的上皮细胞释放的氧化磷脂（PEox）抑制ILC3分泌IL-22，削弱肠道的屏障修复能力。
4. 针对FXR、ACSL4或铁死亡的干预可以显著改善小鼠NEC的症状，并提高生存率超过50%。

四、临床转化启示

1. 血浆FGF19与脂质过氧化物（LPO）可能成为NEC的早期诊断标志物。
2. 未来的治疗方向包括开发肠道特异性FXR拮抗剂（如Gly-β-MCA）或铁死亡抑制剂，亦可通过益生菌或丁酸来调控肠道菌群。

总结而言，这项研究首次揭示了FXR-铁死亡-ILC3轴在NEC中的核心作用，为理解肠道炎症的分子机制提供了全新的视角，并为临床干预提供了有针对性的靶点。多组学技术与跨物种模型的结合，充分展现了转化医学研究的强大潜力。

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