猪流感通用荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）使用说明书

产品信息

产品名称：猪流感通用荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）

英文名称：Swine Influenza Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

包装规格：50T/盒

预期用途

本试剂盒基于实时荧光PCR原理，旨在定性检测猪流感病毒，辅助诊断猪流感病毒引发的流感及其相关并发症，具有重要的临床指导意义。

原理

试剂盒采用针对猪流感病毒高度保守区域的特异性引物和探针。当反应体系中存在猪流感病毒基因组模板时，PCR反应会释放荧光信号。通过荧光定量PCR仪实时监测PCR过程中相应通道的信号，从而实现检测结果的定性分析。

试剂盒组成

注：阴性对照为灭菌纯水，阳性对照为含猪流感病毒靶基因的质粒。

储存条件及有效期

需避光存放于-20℃以下，避免反复冻融，有效期为12个月。

适用仪器

本试剂盒适用于多种实时荧光定量PCR仪，包括但不限于ABI系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列及杭州博日系列。

样本要求

1. 样本采集：可根据以下方法收集咽喉及鼻拭子样本：

• 咽喉拭子：深插拭子至喉头及上颚裂，来回刮3-5次以收集分泌液。
• 鼻拭子：将拭子深入鼻腔及周围圈沾取分泌液。
• 将采集的咽喉与鼻拭子放入含有10mL生理盐水的离心管中备份。

2. 血液或血清样品：无菌注射液抽取样品，置于离心管中待检。

3. 标本采集管应包含病毒运输液及蛋白稳定剂。

4. 防止样本间的交叉污染。

5. 标本一旦收集，应尽快检测；如不能立即检测，可置于2-8℃冷藏保存。长期保存应冻存于-80℃以下，避免反复冻融。

检验方法

试剂准备

1. 从冰箱取出试剂盒，取出实验所需试剂充分融化混匀，并瞬时离心以去除管壁附着液体。

2. 根据实验需求核算反应数（n），按反应体系计算所需试剂量。

3. 在无菌离心管中加入试剂，充分混匀后瞬时离心。按20μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。

样本准备

使用QIAGEN或Roche RNA提取试剂盒提取RNA，具体操作遵循试剂盒说明书。

加样

在PCR反应样本管中分别加入处理好的待测样本RNA各5μL，终体积25μL/管，盖紧PCR反应盖并混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。

阴性和阳性对照管各加5μL相应对照品，终体积为25μL/管。

PCR扩增

将准备好的PCR反应管放置在实时荧光定量PCR仪的样品槽中，记录放置顺序，设置核酸扩增参数进行PCR扩增。

检验结果的解释

根据检测结果，判断样本中是否存在SIV病毒，阳性结果和阴性结果的解释详见说明书。

注意事项

1. 实验室应遵循国家基因扩增检验相关管理规范。

2. 样本处理过程中应在0-4℃下进行，并尽快上机检测。

3. 各区域物品应专用，避免交叉使用。

4. PCR反应管及其它实验用品结束后应及时清洁与消毒。

5. 试剂应在使用前充分融化混匀，并瞬时离心。

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