实验室试剂的解冻与稀释步骤

试剂解冻与混合

1. 从冰箱中取出试剂。
2. 缓慢解冻试剂，确保温度稳定。
3. 轻轻颠倒容器进行混匀，避免产生气泡。
4. 使用低速离心将气泡去除。

注意：在混匀时要尽量避免气泡的产生，因为气泡可能影响酶的活性及实验结果的准确性。

稀释步骤

1. 如需追踪模板，请按照指定步骤进行稀释。
2. 如无需追踪模板，可直接用无菌超纯水稀释cDNA，或者使用cDNA的原液。

在荧光定量实验中，常用的仪器为96孔反应装置，通常为12列×8行的结构。

基因1检测组分准备

对于大体系配制，建议准备每孔18μL的混合溶液。具体组成为：

• HieffUNICON®ColorGPSqPCRMasterMix: 10μL
• 正向引物（10μM）: 0.4μL
• 反向引物（10μM）: 0.4μL
• 无RNase的H2O: 7.2μL

上样体系配置

在完成加样后，确保每个试管盖紧，并轻轻弹打管壁以确保混合均匀。接着放入离心机短暂离心1-2秒，确保再次轻弹管壁以去除气泡，最后放置于洁净的96孔PCR管架上。

备注： 检查每次吸样是否存在气泡，因为气泡可能导致实验数据的偏差。

实验设置

在上机前，仔细检查管子，确保管盖、管身无污染。若采用常规程序，设置循环步骤的温度及时间，例如：

• 预变性：95℃ 2min 1次
• 变性：95℃ 10sec 40次
• 退火/延伸：60℃ 30sec

设备推荐

以下是推荐使用的仪器及相关产品：

• PG电子提供的高灵敏显色示踪荧光定量预混液(Cat#11188ES)特别适合用于发展相关研究。
• 其他推荐产品包括：高灵敏通用型荧光定量预混液(Cat#11184ES)、高特异高荧光值荧光定量预混液(Cat#11185ES)等。

选择合适的试剂与设备，可以有效提升实验的灵敏度与特异性，确保在生物医疗研究中得到准确可靠的结果。